Skip to content

Transmisja wirusa Zachodniego Nilu poprzez transfuzję krwi w Stanach Zjednoczonych w 2002 roku cd

3 miesiące ago

502 words

Próbki przygotowano przy użyciu wcześniej opisanych metod ekstrakcji RNA (objętość ekstrakcji 200 .l lub mniej) i wzorów primer-sonda (dolna granica wykrywalności, jednostka tworząca łysinki 0,8 West Nile [pfu] na mililitr) .13 Jeśli dawcy miał przeciwciało IgM wirusa Zachodniego Nilu w badaniach kontrolnych i jeśli wyniki testu PCR w standardowych objętościach były ujemne, próbki uzyskane w czasie dawstwa badano za pomocą zmodyfikowanego testu PCR TaqMan. W tym teście RNA ekstrahowano z 500-.l objętości ekstrakcji, a 25 .l RNA zastosowano w reakcji amplifikacji (dolna granica wykrywalności dla tej ekstrakcji o dużej objętości wynosiła 0,1 pfu na mililitr). Amplifikację i fluorescencję wykrywano za pomocą systemu detekcji PCR iCycler iQ Real-Time (Bio-Rad Laboratories); 45 cykli amplifikacji przeprowadzono zgodnie z zaleceniami producenta. W obu testach dodatni wynik określono jako wzrost sygnału fluorescencji powyżej zdefiniowanej wartości progowej w ciągu 37 cykli dla każdego z dwóch różnych zestawów primer-sonda i zmianę fluorescencji, która była dwa lub więcej razy większa niż średni sygnał z ośmiu negatywnych studzienek zawartych w każdym teście. W dołkach ujemnych 5 .l wody wolnej od RNazy i DNazy zastąpiono 5 .l ekstrahowanego RNA. Niejednoznaczny wynik został zdefiniowany jako test pozytywny tylko dla jednego z dwóch zestawów primer-sonda. Wszystkie pozytywne i niejednoznaczne testy PCR powtórzono. Stężenie wirusa Zachodniego Nilu w próbkach badawczych oszacowano, porównując liczbę cykli PCR, które były wymagane, aby przekroczyć wartość progową z liczbą cykli wymaganych do tego przez próbki o znanych stężeniach wirusa. Te znane standardy otrzymano przez wykonanie seryjnych rozcieńczeń wirusa West Nile zaszczepionego ludzką surowicą.
Kultura wirusowa
Gdy próbka była wystarczająco duża, próbki pozytywne na wirusa West Nile za pomocą PCR testowano na obecność wirusa przez izolację wirusa na komórkach Vero. Pozytywne wyniki zostały określone przez pojawienie się efektu cytopatycznego, co zostało potwierdzone w testach PCR.
Testy serologiczne
Próbki pobrane w czasie dawstwa i próbki surowicy pobrane podczas obserwacji badano pod kątem przeciwciał IgM swoistych dla wirusa West Nile przy użyciu oznaczenia immunoabsorpcyjnego z wiązaniem IgM-capture i potwierdzono testem neutralizującego przeciwciała na łysinkę.13 , 14
Klasyfikacja przypadków
Potwierdzony przypadek zakażenia wirusem Zachodniego Nilu po transfuzji wymagał dowodów zakażenia u biorcy składnika od dawcy z potwierdzoną wiremią (Tabela 1). Raporty bez takich danych zostały sklasyfikowane jako niejednoznaczne lub niereprezentujące przypadku.
Analiza statystyczna
Okresy inkubacji porównywano wśród biorców transfuzji przy użyciu testu t. Test t użyto również do porównania średnich poziomów wiremii między objawowymi a bezobjawowymi dawcami. Dokładny test Fishera zastosowano do porównania objawów dawców z dowodami wiremii podczas dawstwa z donorami bez wiremii, którzy byli IgM-ujemni w czasie obserwacji (SAS, wersja 8.02, SAS Institute). Skorygowane ilorazy szans dla tych objawów obliczono przy użyciu regresji logistycznej, po dostosowaniu do płci i wieku, w celu zidentyfikowania objawów w populacji dawców, która przewidziała infekcję wirusem zachodniego Nilu.
[przypisy: dakolen, dentysta z wieży, migotanie w oku ]
[przypisy: dakolen, bilobil intense, psychoterapia mokotów ]

0 thoughts on “Transmisja wirusa Zachodniego Nilu poprzez transfuzję krwi w Stanach Zjednoczonych w 2002 roku cd”